Определение группы крови и резус-фактора методом стандартных сывороток

Система АВО — наиболее распространенная в мире классификация человеческой крови. Основа разделения крови на 4 группы — принцип взаимодействия антигенов и антител. В эритроцитах (красных тельцах) человеческой биологической жидкости может находиться 2 агглютиногена — А и В, а в плазме 2 вида агглютинина — Анти-А и Анти-В. Их сочетание является тем признаком, по которому определяют группу — 0, А, В или АВ, соответственно, 1, 2, 3 или 4. Определение групп крови по стандартным сывороткам, содержащим антигены, — это простая и быстрая реакция.

Суть метода

Определяют группу с помощью изогемагглютинирующих средств — лабораторных реагентов. Исследование проводится, когда смешивают реагент с нативной кровью, и при добавлении раствора натрия хлорида (0,9%).

В процессе исследования изучается, какие антитела (антигены) имеются у натива, а какие отсутствуют. Таким образом и определяется, какая кровь — 0, А, В или АВ.

В каждой группе свой набор агглютиногенов (антигенов) и агглютининов (антител):

• 1 (или нулевая) — на поверхности красных кровяных телец присутствует антитело A и антитело B. При этом полностью отсутствуют антитела в сыворотке. Поэтому реакции агглютинации не происходит.
• 2 — есть в крови агглютинин B (антитело), агглютиноген (антиген) А.
• 3 — наличествует антиген В и антитело A.
• 4 — присутствуют оба белка (2 антитела), и нет ни одного антигена. Она является наименее распространенной — около 8% населения.

Определение группы крови по стандартным сывороткам необходимо для того, чтобы при переливании агглютинация ни привела к летальному исходу того, кто подвергся гемотрансфузии. Реакция агглютинации, т. е. склеивания, происходит тогда, когда при попадании сыворотки на эритроциты натива начинается процесс уничтожения этих телец.

Склеиваться клетки будут при взаимодействии антигена А и антитела A. И при взаимодействии антигена В и антитела B. При агглютинизации в пробе всегда появляются хлопья — склеенные между собой красные клетки.

Изготовление сыворотки

Сыворотки для определения группы крови производят в лабораторных условиях из плазмы человека-донора. Занимаются изготовлением этих реагентов в пунктах переливания. Пробы хранятся и перевозятся в герметических колбах при определенной температуре. В сыворотке для определения группы содержатся α- и β-гемагглютинины. На колбе указано, каковы концентрация этих белков, срок и температура хранения.

Проведение исследования

Исследование проводят 2 раза. Сначала простым способом, сразу после забора, затем методом перекрестной реакции в дезинфицированной лаборатории. Есть несколько условий проведения реакции. Узнать группу крови с помощью стандартных сывороток возможно при условии, что срок их годности не истек, а титр (концентрация) реагента будет 1:32 и выше. Важно соблюдение температуры в помещении +15…+25ºС .

Ход анализа таков:

1. На тарелке и пластиковом планшете подписывают номера групп возле углублений.
2. Пробы каждой сыворотки помещают в отведенные углубления в планшете (по 1 или 2 капли).
3. Пипеткой отмеряют по капле крови самого пациента, располагают их рядом с сыворотками и несколько раз размешивают.
4. В каждую пробу капают изотонический раствор натрия хлорида.
5. Дополнительно используют сыворотку АВ.

По истечении 5 минут видны результаты. Для точности выполняют анализ с реагентами 2 разных серий выпуска. Бывает, что реакция агглютинизации плохая, тогда ее наблюдают через микроскоп.

Обязательно во время проверки исследуют и то, какой резус-фактор — положительный или отрицательный. Резус — это белок, который у большого процента населения присутствует на поверхности эритроцитов. Если он есть, резус положительный. Если белок отсутствует, это фиксируется. Резус-фактор определяется с помощью плазмы и особой анти-Д-сыворотки.

Проверяется наличие резуса таким же образом, как и при определении разряда системы АВО — наблюдая за реакцией склеивания.

Результаты проверки

Первое исследование дает результаты через 3-5 минут. Простой метод со стандартными сыворотками дает 4 возможных варианта:

1. В обеих пробах с сыворотками 2 и 3 групп агглютинации нет. Результат свидетельствует о том, что нативная кровь относится к первому разряду.
2. Свертывание во всех пробах, кроме той, что под номером 2. Вторая группа.
3. Обнаруживается агглютинация в пробе №3, в остальных — нет. Группа соответствует 3.
4. Свертываемость во всех, включая сыворотку АВ. Группа 4.

Определение группы крови стандартными сыворотками возможно в любом медицинском учреждении, т. к. эту процедуру способна провести сразу после забора крови процедурная медсестра.

Метод перекрестной реакции и метод цоликлонов

Методом простой реакции группу устанавливают с помощью лабораторной сыворотки. Второй способ — метод перекрестных реакций — делается лаборантом. Для его проведения используют стандартные эритроциты и плазму самого пациента. Ее добывают, когда в процессе центрифугирования тяжелые клетки отделяются от плазмы.

Для проверки понадобится 2 капли сыворотки после центрифугирования и отстоя не менее чем 1, 5 часа. В лабораторную планшетку опускают 2 капли добытого биологического материала и добавляют каплю со стандартными красными кровяными тельцами. В первую каплю плазмы помещают кровяные тельца с агглютиногенами 2 группы, а во вторую пробу — с антигенами третьей.

Метод перекрестной реакции считается контрольным и более достоверным. Реакция с эритроцитами оценивается следующим образом:

• Агглютинация есть и в 1, и во 2 капле. Это кровь обозначается как 0 или 1.
• Реакции нет в обеих случаях — это 4.
• Реакция склеивания там, где добавляли эритроциты второй категории — это 2. И, соответственно, 3 группа, где контрольные эритроциты третьего варианта.

Метод цоликлонов

Группу системы АВО также можно установить и с помощью цоликлонов. Эти реагенты сделаны при помощи достижений генной инженерии из крови лабораторных мышей. Тут используют моноклональные антитела, продуцируемые только из одной антителообразующей клетки.